روش تولید آنزیم های dna پلیمراز taq و pfu
نویسندگان
چکیده
آنزیمهای پلیمر کننده dnaی taq و pfu از آنزیمهای بسیار مهم در مطالعات ژنتیک مولکولی هستند و در آزمایشگاههای مولکولی در حجم زیادی مورد استفاده قرار میگیرند. این تحقیق به منظور تامین آنزیمهای یاد شده جهت آزمایشگاههای پرمصرف و یک روش ساده خالص کردن این آنزیمها از بقایای باکتری انجام گردید. ابتدا پلاسمیدهای حامل ژنهای تولید کننده آنزیمهای taq و pfu به طور جداگانه به نژادی از باکتری e. coli منتقل شد. باکتریهای تراریخته بر روی محیط کشت 2x sob به مدت 5/4 ساعت در دمای 37 درجه سانتیگراد کشت شده و بعد آنزیم تولید گردید، آنزیمهای مورد نظر با روش خاصی که در تحقیق حاضر ارائه گردیده استخراج و خالص سازی گردیدند. به منظور آزمون کارآیی و تعیین میزان پرکننده مورد نیاز جهت رساندن غلظت آنزیم به سطح مطلوب از ماده رنگ آمیزی bradford استفاده گردید. کارآئی و خلوص آنزیمهای تولید شده در مقایسه با آنزیم تجاری موجود در آزمایشگاه در تکثیر قطعهای از dna ژنوم گیاه آرابیدوپسیس اکوتیپ کلمبیا توسط pcr مورد تأیید قرار گرفت. بنابراین روش ارائه شده در این تحقیق برای تولید آزمایشگاهی و محلی آنزیم هایtaq و pfu با خلوص بالا توصیه میگردد.
منابع مشابه
روش تولید آنزیمهای DNA پلیمراز Taq و Pfu
آنزیمهای پلیمر کننده DNAی Taq و Pfu از آنزیمهای بسیار مهم در مطالعات ژنتیک مولکولی هستند و در آزمایشگاههای مولکولی در حجم زیادی مورد استفاده قرار میگیرند. این تحقیق به منظور تامین آنزیمهای یاد شده جهت آزمایشگاههای پرمصرف و یک روش ساده خالص کردن این آنزیمها از بقایای باکتری انجام گردید. ابتدا پلاسمیدهای حامل ژنهای تولید کننده آنزیمهای Taq و Pfu به طور جداگانه به نژادی از باکتری E. coli ...
متن کاملبیان و خالص‌سازی ژن نوترکیب Cold sensitive Taq DNA polymerase در E.coli
سابقه و هدف: آنزیم DNA پلیمراز مقاوم به حرارت بعلت کاربرد آن در PCR و تحقیقات بیولوژی مولکولی توجه زیادی را به خود معطوف ساخته است و در نتیجه اهمیت مطالعه روی DNA پلیمرازهای مقاوم به حرارت مختلف را دو چندان نموده است. هدف از این مطالعه سنجش عملکرد و میزان تولید آنزیم DNA پلیمراز حساس به سرما و مقاوم به حرارت تولید شده در میزبان باکتریایی و خالص‌سازی سریع و ارزان آن می‌باشد. مواد و روش‌ها: ب...
متن کاملبیان فراوان و خالص سازی بخشی آنزیم pfu دی.ان.آ پلیمراز از باکتری pyrococcus furiosus
واکنش زنجیره های پلیمراز که معمولا به اختصار pcr خوانده می شود، روشی بسیار قدرتمند در تکثیر ردیف منخبی از نوکلئوتیدهای قطعات dna است. انجام این واکنش همانند سازی به فعالیت آنزیم های پلیمرزا وابسته است که مقاومت به گرما در این آنزیم ها از مهم ترین خصوصیات آن ها محسوب می شود. در واقع پس از کشف و کاربرد آنزیم های پلیمرزا مقاوم به حرارت بود که pcr به یک روش رایج در آزمایشگاه ها تبدیل شد. علاوه بر ا...
15 صفحه اولDNA sequencing using Taq polymerase.
Three DNA polymerases, namely E.coli DNA polymerase 1 (Klenow), reverse transcriptase and T7 DNA polymerase (sequenase), are commonly used for DNA sequencing by the chain termination method of Sanger and colleagues [1). However, the secondary structure of the DNA template can impede the progress of all three polymerases. I have developed a novel procedure in which the thermostable polymerase of...
متن کاملNucleotide-mimetic synthetic ligands for DNA-recognizing enzymes One-step purification of Pfu DNA polymerase.
The commercial availability of DNA polymerases has revolutionized molecular biotechnology and certain sectors of the bio-industry. Therefore, the development of affinity adsorbents for purification of DNA polymerases is of academic interest and practical importance. In the present study we describe the design, synthesis and evaluation of a combinatorial library of novel affinity ligands for the...
متن کاملبیان و خالص سازی ژن نوترکیب cold sensitive taq dna polymerase در e.coli
سابقه و هدف: آنزیم dna پلیمراز مقاوم به حرارت بعلت کاربرد آن در pcr و تحقیقات بیولوژی مولکولی توجه زیادی را به خود معطوف ساخته است و در نتیجه اهمیت مطالعه روی dna پلیمرازهای مقاوم به حرارت مختلف را دو چندان نموده است. هدف از این مطالعه سنجش عملکرد و میزان تولید آنزیم dna پلیمراز حساس به سرما و مقاوم به حرارت تولید شده در میزبان باکتریایی و خالص سازی سریع و ارزان آن می باشد. مواد و روش ها: بعد ا...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
عنوان ژورنال:
دو فصلنامه تحقیقات ژنتیک و اصلاح گیاهان مرتعی و جنگلی ایرانناشر: مؤسسه تحقیقات جنگلها و مراتع کشور
ISSN 1735-0891
دوره 17
شماره 1 2009
کلمات کلیدی
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023